1927年7月，惲代英被中共臨時(shí)中央派赴九江，后轉(zhuǎn)赴南昌。7月24日，中共中央在武漢召開臨時(shí)中央常委會，惲代英與周恩來、李立三、彭湃、譚平山等5人組成起義前敵委員會，分析敵我形勢，確定起義的時(shí)間、地點(diǎn)、起義部隊(duì)、組織機(jī)構(gòu)、行動計(jì)劃和作戰(zhàn)部署。

　　南昌起義爆發(fā)前，張國燾趕到九江傳達(dá)所謂“國際來電”，企圖阻止起義，遭到惲代英等的強(qiáng)烈反對，惲代英主張必須依靠共產(chǎn)黨人已經(jīng)確定的武裝力量，進(jìn)行獨(dú)立軍事行動，并憤怒地對張國燾說：“現(xiàn)在南昌一切準(zhǔn)備好了，忽然又來了什么國際指示，阻止我們的行動，我是誓死反對的。”“如果你再動搖人心，就要打倒你。”

　　南昌起義勝利后，惲代英任革命委員會委員、主席團(tuán)委員及代理宣傳委員會主任。8月1日，在惲代英的布置下，《宣傳大綱》以及重要的標(biāo)語口號已散發(fā)到各處，負(fù)責(zé)演講做群眾工作的宣傳隊(duì)，已深入到南昌城內(nèi)的大街小巷，系著紅領(lǐng)巾的起義軍巡邏隊(duì)步伐威武地在熱鬧的市區(qū)巡邏。

　　8月2日，惲代英在南昌市組織了5萬人參加的“慶祝革命委員會成立和軍民聯(lián)歡大會”，并在會上慷慨陳詞，闡述了“為了挽救革命，反對國民黨大屠殺的武裝起義的總方針”，“斗志昂揚(yáng)地鼓勵士兵和群眾，為推翻國民黨的反革命統(tǒng)治，捍衛(wèi)工農(nóng)階級的利益，建立革命政權(quán)，必須緊緊地把槍桿子握在手中。”

　　南昌起義勝利后，起義軍按原計(jì)劃撤離南昌開始南征。惲代英忙著做政治思想教育和宣傳工作，“每到行軍休息時(shí)，他總是和戰(zhàn)士們一起，給戰(zhàn)士們做思想工作，宣傳革命必勝，鼓動戰(zhàn)士們英勇奮戰(zhàn)。”面對南征途中各種困難，惲代英從未說一聲勞累困苦，并且還經(jīng)常鼓勵戰(zhàn)士們：“革命本非享福與畏難的人干的事。”行軍途中，他引導(dǎo)戰(zhàn)士們齊聲高唱，解除行軍疲勞。惲代英與士兵同甘共苦，用自己的行動感染大家，提升戰(zhàn)士的革命激情。惲代英身患肺病，組織上照顧配給他一匹馬，但他總是把馬讓給有病的或體弱的同志騎，自己穿著一套粗布軍衣，扛著背包，肩上搭著一條長布手巾，與戰(zhàn)士們一起步行。

　　起義軍在撫州、廣昌、瑞金、長汀、上杭、汕頭等停留時(shí)間較長的城市里，都組織群眾集會，每次都有惲代英講話。他向渴求解放的群眾分析國內(nèi)外政治形勢，解釋革命軍的目的和政策。惲代英的講話通俗易懂，使群眾很容易接受。